自動細(xì)胞計數(shù)儀法采用體細(xì)胞自動計數(shù)儀,設(shè)置有兩個電極并設(shè)定脈沖的臨界水平,當(dāng)牛乳體細(xì)胞通過電極狹縫時會改變液體的電導(dǎo)性從而產(chǎn)生電脈沖,高過臨界水平而被記錄下來,從而計算出牛乳的體細(xì)胞數(shù)量。但此方法需要加入固定試劑甲醛,并需要培養(yǎng)10多個小時的試劑,前期處理麻煩且費時。
體細(xì)胞數(shù)(SomaticCellCount,SCC)指的是每毫升牛乳中的細(xì)胞總數(shù)。體細(xì)胞中大部分是白細(xì)胞(即淋巴細(xì)胞、嗜中性白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞),大約占總數(shù)的98%~99%,剩余1%~2%的體細(xì)胞是乳腺組織上脫落的上皮細(xì)胞。
乳業(yè)發(fā)達(dá)國家把牛乳體細(xì)胞數(shù)量作為新鮮牛奶的收購標(biāo)準(zhǔn)之一,其體細(xì)胞數(shù)的測定已經(jīng)成為一種日常工作。牛乳體細(xì)胞數(shù)的檢測方法主要包括以下幾種:
一、體細(xì)胞計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法
體細(xì)胞計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法是最早期的檢測方法,采用顯微鏡檢測,通過把牛奶涂抹于計數(shù)板中干燥,染色再干燥,清洗再干燥后,在顯微鏡下觀察,人工計數(shù)并折算每毫升牛乳的體細(xì)胞數(shù)。此方法準(zhǔn)確性高,可用作其他快速檢測方法的校準(zhǔn)方法,但該方法制作過程繁瑣,需要的時間較多,不適合在奶廠進(jìn)行現(xiàn)場實時檢測。
二、熒光顯微計數(shù)法
熒光顯微計數(shù)法與牛乳體細(xì)胞計數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)方法大致相同,其改進(jìn)為對體細(xì)胞進(jìn)行熒光染色,通過熒光顯微鏡進(jìn)行檢測,省去了多次干燥環(huán)節(jié),但此方法依然費時費力。
三、CMT法
CMT方法屬于化學(xué)方法,采用化學(xué)試劑破壞牛乳的體細(xì)胞,使其釋放出DNA而產(chǎn)生沉淀或凝塊,觀察沉淀的多少可以間接判斷出體細(xì)胞數(shù)的相對值。此方法是憑經(jīng)驗得到體細(xì)胞數(shù)的大致范圍,不能得到具體數(shù)值。
四、自動體細(xì)胞計數(shù)儀法
自動體細(xì)胞計數(shù)儀法采用體細(xì)胞自動計數(shù)儀,設(shè)置有兩個電極并設(shè)定脈沖的臨界水平,當(dāng)牛乳體細(xì)胞通過電極狹縫時會改變液體的電導(dǎo)性從而產(chǎn)生電脈沖,高過臨界水平而被記錄下來,從而計算出牛乳的體細(xì)胞數(shù)量。但此方法需要加入固定試劑甲醛,并需要培養(yǎng)10多個小時的試劑,前期處理麻煩且費時。
流式細(xì)胞計數(shù)法是自動體細(xì)胞計數(shù)儀法的衍生,其測定原理是用熒光染色劑對體細(xì)胞進(jìn)行染色,染色后的細(xì)胞在激勵光源的刺激下發(fā)射熒光信號,而儀器可將光信號轉(zhuǎn)化為電信號,強(qiáng)迫細(xì)胞一個一個地通過縫隙管道并記錄細(xì)胞個數(shù)。此方法在現(xiàn)有的各國先進(jìn)細(xì)胞分析儀中使用,檢測速度迅速但準(zhǔn)確度不能保證,且價格普遍昂貴,用于大型衛(wèi)生檢測中心較多,而不具有普及到普通奶場的條件。